七彩神仙雌雄与的分辨可在同中求异的情形下区别，一般来说雄鱼常比雌鱼大（这是指同一窝鱼而言）。在有些品第中，雄鱼的头会比较突起，雌鱼的头会较圆顺。在背鳍和臀鳍上，雄鱼通常也会比雌鱼略大一些，色泽条纹上也会常出现差异。例如雌鱼的红色条纹可能会较多，雄鱼较少，甚至没有条纹，这种表现也反映在红色系七彩身上。正因为如此，红色系的七彩神仙雄鱼一般红得多一点，深浓一点。当然这种辨别不可能百分百准确。

　　　　　 七彩神仙的雌雄分辩，最准确的方法就是从生殖器上判定。雄鱼的输精管较为尖细，雌鱼的产卵管较为圆而粗，以下是各项分辨雌雄的特征：

1. 尺寸：雄鱼较大，母鱼较小。

2. 某些雄鱼背鳍有尖。在用性激素扬色过的鱼或者繁殖期的鱼身上尤为明显。

3. 雄鱼额头会有隆起。

4. 雄鱼背鳍较高，背鳍与腹鳍的渐近线交点离尾部较远。

5.　 雄鱼鳃盖外缘的弧度比雌鱼的小。腮被花纹覆盖面较大因此显得比较密实而纹路不及雌鱼的复杂。